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非洲豬瘟病毒檢測整體解決方案
編輯:百泰克 上傳時(shí)間:2019-02-25 瀏覽次數(shù):34997

1.常見樣本類型:

分泌物、血液、脾臟、扁桃體、腎臟和淋巴結(jié)等樣本中的非洲豬瘟。

2.. 樣品預(yù)處理方式(樣本處理區(qū))

2.1 樣本前處理

2.1.1組織樣品:每份組織分別從 3 個(gè)不同的位置稱取樣品約 1g,手術(shù)剪剪碎混勻后取

0.5g 于研磨器中研磨,加入 1.5mL 生理鹽水后繼續(xù)研磨,待勻漿后轉(zhuǎn)至 1.5mL 滅菌離心管中,8000rpm 離心2min,取上清液 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中;病樣組織直接上機(jī)提取也有實(shí)驗(yàn)室在用(江蘇泰州農(nóng)委)

2.1.2全血樣本:取全血離心后的上清(血清) 200μL 于 1.5mL 滅菌離心管中。

相關(guān)實(shí)驗(yàn)設(shè)備:動物組織研磨儀、手持式電動組織研磨儀


根據(jù)樣本數(shù)量多少可用高通量組織破碎儀或者手持式組織研磨儀破碎組織樣本,之后用離心機(jī)將樣本離心分層,取上清液。


2.2樣本保存和運(yùn)輸

上述標(biāo)本短期內(nèi)可保存于-20℃,長期保存可置-70℃,但不能超過 6 個(gè)月,標(biāo)本運(yùn)送應(yīng)采用 藍(lán)冰和干冰運(yùn)輸,嚴(yán)禁反復(fù)凍融。


2.3 DNA 提取

對上述處理好的標(biāo)本加入到預(yù)裝好提取試劑的96深孔板中,將加好樣本的耗材放置到96全自動核酸提取儀中提取核酸。


96全自動核酸提取儀用于病毒核酸的提取,配套提取試劑可以以散裝形式提供,也可以以預(yù)裝的形式提供,96高通量移液工作站可以用于散裝試劑的分裝。



3. 試劑配制(試劑準(zhǔn)備區(qū))

根據(jù)待檢測樣本總數(shù),設(shè)所需要的 PCR 反應(yīng)管管數(shù)為 N(N=樣本數(shù)+1 管陰性對照+1 管陽性對照;樣品每滿 7 份,多配制 1 份),將上游引物、下游引物、熒光定量探針、酶液預(yù)混好,將混合好反應(yīng)液分裝到 PCR 反應(yīng)管中。舉例如下:

根據(jù)樣本的多少可以選用96高通量移液工作站或移液排槍進(jìn)行體系的配置和分裝。


4. 加樣(樣本處理區(qū))

將提取的 DNA、陽性質(zhì)控品、陰性質(zhì)控品各取一定量,分別加入相應(yīng)的反應(yīng)管中,蓋好管蓋,混勻,短暫離心。

5. PCR 擴(kuò)增(核酸擴(kuò)增區(qū))


5.1 將待檢測反應(yīng)管置于熒光定量 PCR 儀反應(yīng)槽內(nèi);

5.2 設(shè)置好通道、樣品信息,反應(yīng)體系設(shè)置為 20μL;

熒光通道選擇: 檢測通道(Reporter Dye)FAM, 淬滅通道(Quencher Dye)NONE,ABI 系列儀器請勿選擇 ROX 參比熒光,選擇 None 即可。

5.3 相關(guān)設(shè)備:

BTK-6 熒光PCR儀、BTK-10 超快速熒光PCR儀、ABI7500、LightCycler、Bio-Rad、eppendorf 等系列熒光定量 PCR 檢測儀。



6. 結(jié)果分析判定

按照非洲豬瘟核酸檢測試劑盒指導(dǎo)進(jìn)行判讀。


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